产品货号：
SYA209
中文名称：
甲型肝炎(HAV)病毒单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称：
Hepatitis A virus fluorescence RT-qPCR detection kit
产品规格：
48T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是百奥莱博公司基于荧光定量RT-qPCR技术研发的，适用于血液等样本中甲型肝炎病毒RNA定量检测的试剂盒。
| 组分 | 规格 |
| 甲型肝炎病毒反应液 | 672μL |
| 甲型肝炎病毒酶混合液 | 48μL |
| 阴性对照(NTC) | 50μL |
| HAV阳性对照(2.16×104copies/mL) | 50μL |
| HAV阳性对照(2.16×105copies/mL) | 50μL |
| HAV阳性对照(2.16×106copies/mL) | 50μL |
| HAV阳性对照(2.16×107copies/mL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
- 本试剂盒仅供体外科研检测使用，操作人员必须经过培训，试剂盒使用前请仔细阅读说明书全文。
- 不要使用过期组分，不同批次试剂盒的组分液不可混合使用。
- 本试剂盒中的试剂尽量避免反复冻融，冻融不要超过5次，否则建议分装后使用。
- 样本采集和处理过程应遵循生物安全管理要求。
- 荧光PCR实验严格分区操作，各区应有专用的手套、移液器等。不得交叉使用，避免污染；工作人员应遵循单方向工作原则，各工作区相对隔离。
- 测试样本时，应做好生物安全防护。
- 实验完毕后，试剂、样本应进行无害化处理。
- 样本准备：采集2mL静脉血至EDTA-2Na抗凝管
- RNA提取：可选购我公司的RNA提取试剂盒(货号：SYA781)，或其他合适的RNA提取试剂，并按相应产品的使用说明操作。
- 阳性对照和阴性对照无需进行核酸提取，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样本制备区域加入阳性对照。
- 试剂准备：从试剂盒中取出甲型肝炎病毒反应液、酶混合液，室温融化并震荡混匀后，10000rpm离心10s。
- 配制反应体系：
成分 用量 甲型肝炎病毒反应液 14μL 甲型肝炎病毒酶混合液 1μL 样本核酸/阳性对照/阴性对照 5μL - 建议由低浓度向高浓度的顺序加入阳性对照模板，避免高浓度阳性对照造成的污染。
- 反应程序：
过程 温度 时间 循环数 反转录 45℃ 10min 1 预变性 95℃ 10min 1 PCR扩增 95℃ 15sec 40 60℃ 45sec - 在60℃延伸时收集荧光信号，报告基团设置为FAM。
- 使用ABI品牌仪器时，需将淬灭基团改为NONE，请勿选择ROX参比荧光。
- 在60℃延伸时收集荧光信号，报告基团设置为FAM。
- 试验成立判定
- 阴性对照：不应产生任何的扩增曲线。
- 阳性对照：均产生扩增曲线。
- 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
- 阴性对照：不应产生任何的扩增曲线。
- 结果判定
- 定性分析：
对于可疑样本，重新提取核酸，再次进行对应的PCR检测。如果重复结果Ct值≤40，且出现对数扩增曲线判为样本阳性；否则判为样本阴性。Ct值≤35 无Ct值 35≤Ct值≤40，且有明显扩增曲线 FAM 阳性+ 阴性- 可疑样本 - 定量分析：使用Excel等线性分析工具，根据阳性对照梯度浓度值与仪器所测Ct值，创建线形图及分析公式，相关系数R2应介于0.97～1之间。通过将样本的Ct值代入公式可计算样本RNA含量的拷贝数(lgX)，计算10x即为未知样本核酸原始浓度。
例如：Y轴截距＝41.5，斜率＝-3.83
公式为：Y(CT值)＝-3.83lgX+41.5
- 定性分析：
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